序列特異性寡核苷酸探針聚合酶鏈反應技術(PCR-sequence specific oligo—nucleotide probing,SSOP)的分析步驟是:先對SNP的多態區域進行擴增,在擴增過程中對PCR產物進行同位素或非同位素標記,然后針對PCR擴增產物根據堿基配對原則設計系列寡核苷酸探針,并將其固定在膜上,最后將PCR嚴物與膜上的探針雜交、放射自顯影,根據信號判斷結果。PCR-SSOP分型技術是目前最常用、認可度最高的DNA分型技術之一(Delahunty et a1.,1996)。PCR-SSOP技術具有靈敏度高、特異性強、需樣本量少的特點,用于SNP分型主要包括正相SSOP方法和反相SSOP方法兩種。前者是將PCR產物固定在膜PCR用標記的探針與之進行雜交;后者是將特異性探針固定在膜上,用標記的PCR產物與之雜交,目前廣泛采用的是反相SSOP方法。PCR-SSOP技術由于所用的載體大多為膜或微滴定板,對于復雜而眾多的SNP等位基因來說,它不具有集成化的優點,而且洗脫條件比較繁瑣,難以實現標準化和自動化。
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